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小鼠cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)elisa檢測試劑盒?操作步驟

點擊次數(shù):793 更新時間:2022-02-17

小鼠cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)elisa檢測試劑盒操作步驟:


1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。


240pg/ml          5號標(biāo)準(zhǔn)品               150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液


120pg/ml          4號標(biāo)準(zhǔn)品               150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液


60pg/ml           3號標(biāo)準(zhǔn)品                150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液


30pg/ml           2號標(biāo)準(zhǔn)品               150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液


15pg/ml          1號標(biāo)準(zhǔn)品                 150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液


    2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于         酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。


3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   


4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用


5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。


6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。


7. 溫育:操作同3。


8. 洗滌:操作同5。


9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.


10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。


11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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