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新聞動態(tài)   News首頁>>新聞動態(tài)>>17羥孕酮Elisa試劑盒試驗操作過程

17羥孕酮Elisa試劑盒試驗操作過程

點(diǎn)擊次數(shù):1042次 更新時間:2017-07-21

17羥孕酮Elisa試劑盒檢查以靈敏度較高、特異性較好等特點(diǎn)在食品安全檢查中得到廣泛的運(yùn)用,但在操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢查作用影響較大。如不留意,有也許致使顯色不*、花板、檢查無效等成果。所以試驗進(jìn)程中應(yīng)留意選擇質(zhì)量的檢查試劑,嚴(yán)厲依照試劑闡明書進(jìn)行操作。在ELISA操作進(jìn)程中,一起做好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,仔細(xì)做好各項查驗記載,才干確保ELISA檢查質(zhì)量。
一、樣品的保留
用于ELSIA檢查的樣本十分廣泛,包含各種動物安排、動物體液以及其他食品獲取物等。有些樣本能夠直接經(jīng)過簡略離心、稀釋,有些則需求經(jīng)過理化辦法進(jìn)行獲取。檢查樣品應(yīng)確保新鮮,經(jīng)前處理的獲取液應(yīng)及時進(jìn)行檢查,時刻越長,獲取液中的抗原的效價越低。如不及時檢查,應(yīng)及時放4℃冰箱保留。防止細(xì)菌污染,因菌體中也許富含內(nèi)源性HRP,也許會致使假陽性反響。如在冰箱中保留過久,其間的HRP也許發(fā)生聚合,在間接法ELSIA檢查中可使本底加深。所以標(biāo)本如需保留做屢次檢查,宜選用少數(shù)分裝冰箱保留。安排樣本若不及時做處理,應(yīng)當(dāng)放置-15℃冰箱保留。
二、試劑的預(yù)備
嚴(yán)厲依照試劑盒的闡明書的請求預(yù)備好需求用到的試劑。LEISA檢查中應(yīng)選用蒸餾水或許去離子水,洗刷用水應(yīng)新鮮和高質(zhì)量,留意檢查是不是需求和洗刷液進(jìn)行稀釋。自配的緩沖液運(yùn)用PH計測量校對。從冰箱取出的試劑有必要與室溫平衡方可運(yùn)用。試劑盒中本次試驗不需求的試劑有些及時放回冰箱保留。
三、加樣
在ELSIA加樣進(jìn)程中,應(yīng)加所加物加到ELISA板孔的底部,防止加在孔壁上部,并留意不行濺起,不行發(fā)生氣泡。加標(biāo)本通常運(yùn)用微量加樣器,按規(guī)則的量參加孔板中。每次加標(biāo)本有必要更換槍頭,防止穿插污染。加酶符號物和底物液時可用定量多道加樣器,使加樣進(jìn)程敏捷完成。
四、溫育
溫育的方法通常選用水浴,可將酶標(biāo)板置于水浴箱中,酶標(biāo)板底貼著水面,是溫度敏捷平衡。為防止蒸騰,酶標(biāo)板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封或許保鮮膜覆蓋板孔,此刻可讓反響板漂浮在水面上。若保溫箱,酶標(biāo)板應(yīng)放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱功能杰出的資料或許如金屬等,在盒底墊濕的紗布,將酶標(biāo)板放在紗布上。這樣能確保安穩(wěn)敏捷平衡。不管水浴還是濕盒溫育,反響板均不宜疊放,以確保各板的溫度能敏捷平衡。室溫溫育的反響,17羥孕酮Elisa試劑盒操作時的室溫要嚴(yán)厲約束在室溫的范圍內(nèi),規(guī)范室溫溫度是指20℃-25℃,詳細(xì)的操作時刻依據(jù)闡明書的請求嚴(yán)厲控制溫育。
五、洗刷
洗刷在ELISA進(jìn)程中雖然不是一個反響進(jìn)程,可是卻決議著試驗的勝敗,ELSIA反響即是靠洗刷來到達(dá)將游離和的酶符號物別離的意圖。經(jīng)過洗刷來清洗掉殘留在酶標(biāo)板是未能與固相抗原或抗體的物質(zhì),已經(jīng)在反響進(jìn)程中十分特異性地吸附于固相載體上的攪擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料資料對蛋白質(zhì)的吸附石普遍性的,而在洗刷時又應(yīng)把這種非特異性吸附的攪擾物質(zhì)洗刷下來。能夠說在ELSIA操作進(jìn)程中,洗刷是首要的關(guān)鍵技術(shù),每一次清洗都有必要謹(jǐn)慎進(jìn)行,操作者應(yīng)嚴(yán)厲依照請求進(jìn)行洗刷。清洗的方法有手藝清洗和洗板機(jī)主動清洗兩種。下面首要介紹手藝清洗方法。
1、吸干或許甩干孔內(nèi)反響液
2、用洗刷液洗一遍。(將洗刷液注滿板孔后,即甩去)
3、浸泡,將洗刷液注滿酶標(biāo)孔,放置1-2min,間歇搖擺,浸泡時刻不行隨意縮短。
4、甩掉孔內(nèi)液體,用清洗毛巾或許吸水紙拍干。
5、重復(fù)3和4進(jìn)程,洗刷4次。
六、顯色和比色
顯色是ELSIA中的zui后一個溫育進(jìn)程,此刻酶催化無色底物出產(chǎn)有色商品。反響的溫度和時刻仍是影響顯色的zui主要的要素。參加底物后的反響時刻和溫度應(yīng)當(dāng)按規(guī)則嚴(yán)厲控制。
七、酶標(biāo)儀讀板
測讀吸光度值時,要選用商品的靈敏吸收峰。有的酶標(biāo)儀可用雙波長讀數(shù),即每孔先后讀兩次,在波長,第二次在不靈敏的波長,兩次測讀不移動酶標(biāo)板的方位。終究讀數(shù)得到值為兩者之差,即靈敏波長值減去不靈敏波長值。雙波長讀數(shù)能夠減少由容器壁劃痕或指紋形成的光攪擾。
八、成果判定
17羥孕酮Elisa試劑盒依據(jù)試驗讀數(shù),成果商品闡明進(jìn)行成果判定。

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