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Elisa試劑盒實驗中蛋白質(zhì)的分離純化

點擊次數(shù):1020次 更新時間:2018-02-28

Elisa試劑盒實驗由于各種蛋白質(zhì)分子顆粒巨細(xì)、親水程度不同,故鹽析所需的鹽濃度也不一樣,因此調(diào)理混合蛋白質(zhì)溶液中的中性鹽濃度可使各種蛋白質(zhì)分段沉積。
影響鹽析的要素有:
溫度:除對溫度靈敏的蛋白質(zhì)在低溫(4度)操作外,通常可在室溫中進(jìn)行。
蛋白質(zhì)鹽析常用的中性鹽,主要有硫酸銨、、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉等。
通常溫度低蛋白質(zhì)溶介度下降。但有的蛋白質(zhì)(如血紅蛋白、肌紅蛋白、清蛋白)在較高的溫度(25度)比0度時溶解度低,更簡單鹽析。
pH值:大多數(shù)蛋白質(zhì)在等電點時在濃鹽溶液中的溶介度zui低。
ELISA試劑盒實驗鹽析前血清要加等量生理鹽水稀釋,使蛋白質(zhì)含量在2.5-3.0%。
蛋白質(zhì)濃度:蛋白質(zhì)濃度高時,欲別離的蛋白質(zhì)常常夾雜著別的蛋白質(zhì)地一同沉積出來(共沉現(xiàn)象)。
其中使用zui多的硫酸銨,它的長處是溫度系數(shù)小而溶解度大(25度時飽滿溶液為4.1M,即767克/升;0度時飽滿溶解度為3.9M,即676克/升),在這一溶解度范圍內(nèi),很多蛋白質(zhì)和酶都可以鹽析出來;
硫酸銨分段鹽析作用也比別的鹽好,不易導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性。硫酸銨溶液的pH常在4.5-5.5之間,當(dāng)用別的pH值進(jìn)行鹽析時,需用硫酸或氨水調(diào)理。
Elisa試劑盒蛋白質(zhì)在用鹽析沉積別離后,需要將蛋白質(zhì)中的鹽除掉,常用的方法是透析,即把蛋白質(zhì)溶液裝入秀析袋內(nèi)(常用的是玻璃紙),用緩沖液進(jìn)行透析,并不斷的替換緩沖液,因透析所需時刻較長,所以在低溫中進(jìn)行。
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