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產(chǎn)品展示   Products細(xì)胞培養(yǎng)>>基礎(chǔ)培養(yǎng)基>>RPMI-1640 無(wú)糖培養(yǎng)基
 
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產(chǎn)品名稱:
RPMI-1640 無(wú)糖培養(yǎng)基
產(chǎn)品型號(hào):
產(chǎn)品報(bào)價(jià):
1
產(chǎn)品特點(diǎn):
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  RPMI-1640 無(wú)糖培養(yǎng)基的詳細(xì)資料:

操作要點(diǎn):

RPMI-1640 無(wú)糖培養(yǎng)基
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)解凍,使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中,避免引起污染。

3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。

5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

商品描述:
RPMI-1640 無(wú)糖培養(yǎng)基

產(chǎn)品名稱

RPMI-1640 無(wú)糖培養(yǎng)基

規(guī)格

500ml

用途

僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

貨號(hào)

EY-XP4265

產(chǎn)品介紹

RMPI 1640培養(yǎng)液是由Moor等研究成功的,最初為培養(yǎng)小鼠白血病細(xì)胞的需要而準(zhǔn)備。開(kāi)始的配方特別適合懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng),主要針對(duì)淋巴細(xì)胞,后經(jīng)多次改良從RPMI 1630、1634,而至RMPI 1640。其組成較為簡(jiǎn)單,但可以適應(yīng)很多種類細(xì)胞的生長(zhǎng)。不僅腫瘤細(xì)胞,而且很多正常組織細(xì)胞可用RMPI 1640進(jìn)行體外培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)室一般將RMPI 1640作為實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞維持的基本培養(yǎng)液,目前RMPI 1640是應(yīng)用最為廣泛的培養(yǎng)基之一。本培養(yǎng)基為無(wú)添加葡萄糖RMPI 1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

培養(yǎng)基主要成份表

+)  酚  紅

+)  L-谷氨酰an

--)  HEPES

--) D-葡萄糖

運(yùn)輸和保存

放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸(儲(chǔ)存條件2-8℃ 避光儲(chǔ)存)產(chǎn)品保質(zhì)期12個(gè)月。


RPMI-1640 無(wú)糖培養(yǎng)基

注意事項(xiàng):
RPMI-1640 無(wú)糖培養(yǎng)基
僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì),請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部;這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低,如有接觸,立即用自來(lái)水沖洗即可。

RPMI-1640 無(wú)糖培養(yǎng)基

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
RPMI-1640 無(wú)糖培養(yǎng)基

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

冷凍保存細(xì)胞之方法?

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

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產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: RPMI-1640 培養(yǎng)基
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021-69985169
13611928337

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